Abstract

DO.02.13

Vergleich der MUC1-, MUC4- und MUC16- Genexpression und Proteinbiosynthese von auf Amnionmembran kultivierten Limbusepithel Zellen mit normalen und pathologischen Gewebe der Augenoberfläche

Kakkassery V., Pauklin M., Steuhl K.-P., Meller D.
Erkrankungen des vorderen Augenabschnittes, Zentrum für Augenheilkunde, Universitätsklinikum Essen, Essen

Ziel: Die limbale Stammzellinsuffizienz zeichnet sich durch eine Konjunktivalisierung der Hornhaut (Pannus), einer Visusminderung sowie, nicht selten, einer Sicca-Symptomatik, aus. Die Transplantation von auf Amnion kultiviertem Limbusepithel stellt eine neuere Therapieform dieser Erkrankung dar. Membran-assoziierte Muzine könnten hierbei eine Rolle in der Tränenfilmintegrität spielen. Ziel der Untersuchung ist es, die MUC1-, 4- und 16-Transkription und Translation in kultivierten Limbusepithel Zellen zu charakterisieren und mit Pannus, sowie gesunder Kornea und Konjunktiva zu vergleichen.
Methode: Gesamt-RNS und Proteine wurden von kultivierten Limbusepithel Zellen (kLEZ) auf Amnionmembran (AM) und Pannusgewebe isoliert. Kornea und Konjunktiva wurden als Kontrolle verwendet. Die Analyse erfolgte mit Hilfe von Real-Time-PCR und Western-Blot-Techniken.
Ergebnisse: In konjunktivalem Gewebe zeigte sich im Vergleich zu kornealem eine hochsignifikant vermehrte Expression von MUC1 und 4 (p<0,001). Die MUC1-Transkription zeigte sich in dem kLEZ (p<0,01) im Vergleich zur Kornea vermehrt, die MUC16-Transkription jedoch vermindert (p<0,0001) und die MUC4-Transkription nicht signifikant verändert. Die Expression aller untersuchten Muzine war, im Vergleich zu dem kLEZ, in der Konjunktiva signifikant höher. Pannus und Konjunktiva zeigten in der Genexpression keine Unterschiede auf. Ähnlich der konjunktivalen Muzinexpression zeigte sich im Pannus im Vergleich zu kLEZ und zur Kornea eine hochsignifikante Erhöhung dieser Transkription (p<0,001). Die Untersuchung dieser Muzine auf Proteinebene bestätigte die Unterschiede auf mRNS-Ebene.
Schlussfolgerungen: Konjunktiva und Pannus zeigten eine vermehrte Genexpression und Proteinbiosynthese der membran-assoziierten Muzine im Vergleich zur Kornea und kLEZ. Die Ergebnisse zeigen, dass hinsichtlich der Oberflächenmuzine weitgehend physiologische Verhältnisse in auf AM ex vivo expandierten Limbusepithel Zellen vorliegen.

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