Abstract

DO.05.08

Triamcinolon Acetonid schützt die Tight Junctions des Retinalen Pigmentepithels vor Oxidativen Stress

Miura Y., Roider J.
Institut für Ophthalmologie, Universitätsklinikum Schleswig-Holstein, Campus Kiel

Ziel: Oxidativer Stress schädigt die Tight Junctions des Retinalen Pigmentepithel (RPE). Das Ziel dieser Studie ist die Beurteilung der Wirkung von Triamcinolon Acetonid (TA) auf die junktionale Integrität des RPE unter oxidativem Stress und die Untersuchung der zugrunde liegenden Mechanismen.
Methode: Porcine RPE-Zellen wurden auf 6-Well-Membran-Einsätze bis zu 4 Wochen nach Konfluenz kultiviert. Die Zellen wurden mit TA (10^-5M) für 30 Minuten inkubiert. FITC-Dextran wurde der oberen Kammer zugefügt und die Zellen mit 2mM Wasserstoffperoxid (H₂O₂) inkubiert. Nach 5 Stunden wurde das Medium aus der unteren Kammer entnommen und die Fluoreszenzintensität mit dem Fluoreszenz-Spektrofluorophotometer gemessen. Die Durchlässigkeit von FITC-Dextran wurde bis zum 21. Tag untersucht. Für immunhistochemische Untersuchungen wurden RPE-Zellen auf Kollagen-beschichteten Deckgläsern kultiviert und für 5 Stunden mit H₂O₂ stimuliert, mit oder ohne 30-Minuten Vorinkubation mit TA (10^-5M). Die Immunlokalisation von Occludin und Aktin wurde mit einem Fluoreszenz-Mikroskop überprüft. Das Verhältnis von reduziertem Glutathion(GSH) zu oxidierten Glutathion (GSSG) wurde durch einen kommerziellen Test-Kit (Trevigen Inc.) bestimmt.
Ergebnisse: Oxidativer Stress durch 2mM H₂O₂ führte zu einem 3-fachen Anstieg des transepithelialen Durchflusses von FICT-Dextran. TA verhinderte diese Erhöhung signifikant und verringerte den Durchfluss über den gesamten Zeitraum. Diese Änderung der Durchlässigkeit war reversibel, sie ging innerhalb von 3 Wochen wieder auf das normale Niveau zurück. Die Zugabe von TA verhinderte auch die H₂O₂-induzierte Veränderung der Occludin-Lokalisation. Der Glutathion-Test zeigte, dass sich das intrazelluläre GSH/GSSG-Verhältnis unter H₂O₂ verringert, während TA dieses Verhältnis durch die Hochregulierung der GSH-Synthese erhält.
Schlussfolgerungen: TA hat eine schützende Wirkung gegen die durch oxidativen Stress induzierte Störung der RPE Tight Junctions durch den Erhalt des zellulären Redox-Status.

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